近日，第21届流感疫苗研讨会（The 21th Meeting Between WHO ERLs, CCs and IFPMA/VE and DCVMN Influenza Vaccine Manufacturers）和第三届流感疫苗效力检测替代方法研讨会（3rd Alternative Potency Assay Workshop）在英国召开。两个会议均由英国国家生物制品检定所（NIBSC）主办，会议主要就流感病毒流行情况、流感疫苗的疫苗株制备、标准物质研发和疫苗质控方法等研究进展进行研讨，共有约60名来自世界卫生组织（WHO）疫苗监管核心实验室、流感参比合作中心（美国、英国、澳大利亚、日本及中国）、药品制造商协会联合会（IFPMA）以及流感疫苗生产企业的代表参加会议。中国食品药品检定研究院生物制品检定所呼吸道病毒室徐康维助理研究员受邀参加了本次大会。

　　 流感流行情况监测汇总

　　WHO在全球建立了流感疫情监测网络，覆盖几乎所有的国家，每个国家均设有若干个哨点医院，负责采集流感症状患者的样本，各国的CDC系统进行病毒分离并鉴定，同时将结果发送至WHO设立的流感合作中心，其结果作为确定下一年度流感疫苗生产用毒株的依据。此次会议上，各合作中心对2015～2016年度的流感流行情况进行了汇报。总体上，今年流感疫情不高于往年流行水平，在日本甚至没有监测到流行峰。而在西亚一些国家如以色列、约旦等则监测到较高水平的2009H1N1pdm流感病毒流行。在我国，H1N1、H3N2与B型流感均有流行，南方地区以2009H1N1pdm流感病毒为主，北方地区以H3N2流感病毒为主。全球主要流行的H1N1病毒株与A/California/7/2009疫苗株比较，抗原性没有发生改变，基因型均为6B型。H3N2型流感病毒今年流行水平较低，并且均能被北半球2015～2016疫苗株（A/Switzerland/9715293/2013）以及南半球2016疫苗株（A/Hong Kong/4801/2014）免疫后血清中和，基因型为3C.2a、3C.3a或3C.3。B型流行程度同样较低，以Yamagata系为主，与疫苗株B/Phuket/3073/2013比较未发生变异。

　　在其他类型流感病毒的检测中，中国CDC报告了H5Nx、H9N2、H7N9及欧亚类禽猪流感H1N1在中国的流行情况。截至2016年1月，中国H7N9共发病684人，死亡277人，其中2015年9月以来共发病25人。人感染欧亚类禽猪流感H1N1于2011年我国江苏首次发现，目前感染5人，临床症状均较轻。2015年发现一例儿童感染病例，中国CDC获得的毒株序列显示该病毒为欧亚类禽猪流感病毒与H1N1dpm09病毒和经典猪流感病毒的重配毒株。没有发现人传染人迹象。目前中国CDC正在进行相应疫苗生产毒株的制备。

　　美国CDC介绍了H5Nx、H9N2和H7禽流感及H3N2v和H1N1v的流行情况。目前总体例数较少，主要通过接触家禽感染。美国的农业部门开展了H3N2v和H1N1v在猪中的监测研究，发现1/4的猪呈现流感阳性。

　 　候选疫苗株制备情况分析

　　结合流感病毒的监测情况，WHO各流感协作中心组织进行生产用毒株的推荐及检测用参考品制备工作。美国纽约医学院2015年共制备了9株2009H1N1pdm、16株H3N2和3株B型的经典重配毒株，其中H3N2野毒株分别来自3c.2a、3c.3a、3c.2、3c.3。英国NIBSC制备了2株H1N1pdm09、4株H3N2 3c.2a和1株H3N2 3c.3a疫苗重配株。澳大利亚CSL制备了2株H1N1、2株H3N2和1株B型流感疫苗重配株。各重配实验室制备的重配株的HA滴度和内部基因的构成各不相同，但很多的重配株均由于内部基因未能重配PR8基因（即野毒株）或产量过低而未进一步开展two-way HI test和产量评估。

　　英国NIBSC与美国FDA合作研究利用PR8骨架构建和评价嵌合式流感疫苗株，RG疫苗的内部基因骨架为PR8，表面基因HA和NA的非编码区来自PR8，编码区来自野毒株，结果显示仅HA嵌合的RG病毒产量高于野毒株和HA、NA同时嵌合的RG病毒。同时应该被考虑的疫苗制备新方法还包括细胞分离毒株、优化重配株骨架、新型合成疫苗等。同时，应改进B型流感重配株平台，构建高产的B型重配株。

　　澳大利亚介绍了使用MDCK细胞（MDCK33016PF）病毒分离率的情况，结果显示MDCK33016PF细胞系对H1、H3、BV、BY的分离率分别为80%、83%、73%和78%，均显著高于鸡胚分离率（H1：44%、H3：36%、BV：29%、BY：28%）。

　　 流感疫苗效力检测替代方法研讨

　　第三届流感疫苗效力检测替代方法研讨会上，各ERL实验室、疫苗生产企业分别介绍了各自开展的流感疫苗效力检测替代方法。

　　由于目前流感疫苗效力检测的金标准SRD法使用的标准试剂需要数月的制备时间，大流感疫情突发时将制约疫苗的研发过程，这促使各机构及企业开展效力试验替代方法的研究。这些方法主要分为以下三类：

　　1. 免疫学方法。使用HA抗体（特异抗体或者通用抗体）来进行定量。主要方法包括竞争ELISA、夹心ELISA、抗体芯片等。

　　2. 受体结合定量法。使用酶标板或SPR芯片包被唾液酸α2，3或唾液酸α2，6糖受体来检测HA含量。

　　3. 理化方法。使用HPLC，质谱等方法对HA定量，其中同位素标记质谱定量法(Isotope Dilution Mass Spectrometer IDMS)已经在CBER/NCEH/NIBSC用于液体抗原标准品（Primary liquid standards）的标定，显示出与传统方法较好的一致性。其他方法尚需更大规模的验证工作。

　　由于流感病毒变异速度快，每年WHO都会根据病毒的流行情况决定疫苗生产毒株。因此，疫苗的生产面临着生产毒株和效力检测用标准品更换的问题，直接影响当年疫苗的生产和接种。参与此次会议，有助于我国掌握国际上的前沿动态，以指导我们的研究和检测工作，为提高我国流感疫苗的质量提供技术支持。

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